細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）-價(jià)格/說(shuō)明書-GIVEI生物
保存方式
保存在－20℃冰箱里，反應(yīng)液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）避免光照，終止液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證 6 月
用戶自備
1.5 毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制和反應(yīng)的容器培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)200 微升 1 厘米光徑比色皿或黑色 96 孔板：用于熒光分析的容器熒光分光光度儀過(guò)熒光酶標(biāo)儀：用于熒光分析2
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開始，將－20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。
、 測(cè)定準(zhǔn)備
1． 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品（例如細(xì)胞裂解萃取液或微粒體樣品等），置于冰槽里
2． 設(shè)定好熒光分光光度儀（溫度為 37℃）：激發(fā)波長(zhǎng) 370nm，散發(fā)波長(zhǎng) 450nm，并置零
3． 準(zhǔn)備好 5 個(gè) 1.5 毫升離心管，標(biāo)記為 1 至 5 號(hào)管
4． 分別加入 xx 微升緩沖液（Reagent A）到每個(gè)離心管
5． 移取 xx 微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到 1 號(hào)管，混勻
6． 小心移取 xx 微升 1 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到 2 號(hào)管，混勻
7． 小心移取 xx 微升 2 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到 3 號(hào)管，混勻
8． 小心移取 xx 微升 3 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到 4 號(hào)管，混勻
9． 將 1 至 5 號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表
管號(hào) 緩沖液（Reagent A） 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E） 測(cè)定體系 標(biāo)準(zhǔn)羥基香豆素濃度
1 xx 微升 xx 微升 xx 微摩爾/升
2 xx 微升 xx 微升 1 號(hào)管 xx 微摩爾/升
3 xx 微升 xx 微升 2 號(hào)管 xx 微摩爾/升
4 xx 微升 xx 微升 3 號(hào)管 xx 微摩爾/升
5 xx 微升 空對(duì)照 0
二、 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定
1． 移取 xx 微升緩沖液（Reagent A）到 1.5 毫升離心管
2． 加入 xx 微升反應(yīng)液（Reagent B）
3． 加入 xx 微升底物液（Reagent C）
4． 加入 20 微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)樣品
5． 上下傾倒數(shù)次，混勻
6． 在 37℃溫度下孵育 15 分鐘，避免光照
7． 加入 xx 微升終止液（Reagent D），混勻
8． 在 37℃溫度下孵育 5 分鐘，避免光照
9． 轉(zhuǎn)移到新的比色皿或黑色 96 孔板
10．即刻放進(jìn)熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)，獲得相對(duì)熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
11．實(shí)際熒光單位：標(biāo)準(zhǔn)樣相對(duì)熒光讀數(shù)－5 號(hào)管標(biāo)準(zhǔn)樣熒光讀數(shù)（作為空對(duì)照）
12．構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y 軸）為實(shí)際相對(duì)熒光單位（RFU）；橫座標(biāo)（X 軸）為標(biāo)準(zhǔn)羥基香豆素濃度（微摩爾/升）
三、 樣品測(cè)定1． 移取 xx 微升緩沖液（Reagent A）到 1.5 毫升離心管
2． 加入 xx 微升反應(yīng)液（Reagent B）
3． 加入 5 微升底物液（Reagent C）
4． 加入 xx 微升待測(cè)樣品（20 微克微粒體蛋白或 100 微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白）（注意：樣品須清澈）
5． 上下傾倒數(shù)次，混勻
6． 在 37℃溫度下孵育 15 分鐘，避免光照
7． 加入 xx 微升終止液（Reagent D），混勻
8． 在 37℃溫度下孵育 5 分鐘，避免光照
9． 轉(zhuǎn)移到新的比色皿或黑色 96 孔板
10．即刻放進(jìn)熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)，獲得相對(duì)熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
11．實(shí)際熒光單位：樣品相對(duì)熒光讀數(shù)－5 號(hào)管標(biāo)準(zhǔn)樣熒光讀數(shù)（作為空對(duì)照）
12．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)羥基香豆素濃度（微摩爾/升）
四、 計(jì)算樣品實(shí)際活性
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為 25 次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． 系統(tǒng)操作過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)定只需 1 次
4． 終止液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全
5． 樣品須澄清，至關(guān)重要（本公司提供細(xì)胞可溶性總蛋白質(zhì)制備試劑盒 GMS30002.1）
6． 如果酶活性過(guò)低，可以增加孵育時(shí)間至 45 分鐘（37℃溫度下）
7． 熒光測(cè)定后，比色皿須清洗徹底
8． 建議待測(cè)樣本為微粒體，其蛋白濃度為 20 微克/100 微升；待測(cè)樣本為細(xì)胞懸液，其蛋白濃度為 100至 200 微克/100 微升（本公司提供 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 GMS30030.1）
9． 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品濃度
10．如果檢測(cè)血液樣品，建議使用體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
11．細(xì)胞色素 P450 酶系單位活性定義為：在 37℃，pH 7.5 條件下，每分鐘內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化 1 納摩爾乙氧基香豆素至羥基香豆素所需的酶量作為個(gè)活性單位
12．本公司提供系列毒理學(xué)檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感
使用承諾
秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說(shuō)明書所述的使用效果。在貨到后 10 天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
訂購(gòu)信息
單組份訂購(gòu)信息
編號(hào) 名稱 規(guī)格
GMS18016.1 細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 25 次
GMS18016.1A 緩沖液（Reagent A） 毫升
GMS18016.1B 反應(yīng)液（Reagent B） 毫升
GMS18016.1C 底物液（Reagent C） 微升
GMS18016.1D 終止液（Reagent D） 毫升
GMS18016.1E 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E） 微升
試劑盒訂購(gòu)信息
產(chǎn)品編號(hào) 名稱 規(guī)格
GMS18001 細(xì)胞/組織 S9 組分分離試劑盒 50 次
GMS18002 細(xì)胞/組織微粒體組分分離試劑盒 50 次
GMS18003 細(xì)胞色素 P450 酶體系濃度定量檢測(cè)試劑盒 20 次
GMS18016.1 細(xì)胞色素 P450 酶（CYP－ECOD）總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 20 次
GMS18016.2 體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素 P450 亞酶（CYP－ECOD）總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 20 次
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王小姐
