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點擊次數(shù):989 發(fā)布時間:2021/6/24 18:03:24
細胞P38激酶總活性光度法定量檢測試劑盒抑制劑篩選
1. 在96孔板上做好相應標記:背景、完全活性和待測抑制劑樣品
2. 按下表加入試劑,進行樣品預處理
內(nèi)容物 | 空背景對照 | 樣本背景 | 完全酶活性 | 待測抑制劑酶活性 |
緩沖液(Reagent C) | xx微升 | xx微升 | xx微升 | xx微升 |
陰性液(Reagent G) | xx微升 | xx微升 | xx微升 | —— |
待測抑制劑 | —— | xx微升 | ―― | xx微升 |
用戶自備的純化酶 | —— | —— | xx微升(1毫單位) | xx微升(1毫單位) |
96孔板每孔總量 | 空背景對照孔 (40微升) | 樣本背景孔 (40微升) | 完全活性孔 (40微升) | 待測抑制劑樣品孔 (40微升) |
輕輕搖動96孔板,混勻,放進30℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘。然后進行下列操作 |
3. 分別移取xx微升緩沖液(Reagent C)到新的96孔板的所有孔里
4. 分別加入xx微升酶促液(Reagent D)
5. 分別加入xx微升反應液(Reagent E)
6. 分別加入xx微升底物液(Reagent F)
7. 輕輕搖動96孔板
8. 在30℃溫度下孵育3分鐘
9. 加入40微升上述預處理的待測樣品
10. 即刻放進30℃酶標儀檢測:測讀30分鐘
11. 抑制活性計算:
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