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· 上 傳 者： 上海極威生物科技有限公司
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· 所屬分類：應(yīng)用方法
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· 資料簡介： 主要用途 通用型細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過組織/細胞內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達，催化生成深藍色的沉積產(chǎn)物，從而在光學顯微鏡下觀察到藍色表達的細胞作為細胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于細胞生物學研究。其適用于各種人體和動物細胞、活體組織以及冰凍組織切片檢測。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，著色敏感。 技術(shù)背景 細胞復(fù)制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現(xiàn)出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，尤其在酸性條件下，細胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加，而成為細胞衰老的生物學標記。 產(chǎn)品內(nèi)容 清理液（Reagent A） 毫升 固定液（Reagent B） 毫升 酸性液（Reagent C） 毫升 稀釋液（Reagent D） 毫升 染色液（Reagent E） 毫升 產(chǎn)品說明書 x1份 保存方式 保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀釋液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用鋁箔封裹，避免光照；有效保證6月 用戶自備 2毫升離心管：用于配制染色工作液 15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液 恒溫培養(yǎng)箱：用于染色孵育 切片儀：用于石蠟或冰凍切片 光學顯微鏡：用于觀察染色后的細胞 實驗步驟 一、 細胞染色 操作一、25cm2細胞培養(yǎng)瓶染色 實驗開始前，將試劑盒里的染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，放進冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液（Reagent D）到2毫升離心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混勻后，放進37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標記為染色工作液。然后進行下列操作： 1． 小心抽去25cm2細胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液 2． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面 3． 小心抽去清理液 4． 小心加入xx毫升固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面 5． 在室溫下孵育5分鐘 6． 小心抽去固定液 7． 小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗細胞表面 8． 小心抽去酸性液 9． 重復(fù)實驗步驟7和8兩次 10． 小心加入xx毫升預(yù)熱的染色工作液，覆蓋整個細胞表面 11． 放進37℃培養(yǎng)箱，孵育3小時至16小時，或細胞呈現(xiàn)藍色（注意：避免液體蒸發(fā)） 12． 在光學顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細胞為陽性細胞，呈現(xiàn)藍色 操作二、24孔細胞培養(yǎng)板染色 實驗開始前，將試劑盒里的染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，放進冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液（Reagent D）到15毫升錐形離心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混勻后，放進37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標記為染色工作液。然后進行下列操作： 1．小心抽去24孔細胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液 2．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面 3．小心抽去每孔里的清理液 4．每孔加入xx微升固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面 5．在室溫下孵育5分鐘 6．小心抽去固定液 7．每孔加入xx微升酸性液（Reagent C），清洗細胞表面 8．小心抽去酸性液 9．重復(fù)實驗步驟7和8一次 10．每孔加入xx微升預(yù)熱的染色工作液，覆蓋整個細胞表面 11．放進37℃培養(yǎng)箱，孵育3小時至16小時，或細胞呈現(xiàn)藍色（注意：避免液體蒸發(fā)） 12．在光學顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細胞為陽性細胞，呈現(xiàn)藍色 上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，主營產(chǎn)品有elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，動物血清，細胞株，標準品，生化試劑盒等。 實驗代做服務(wù)有酶聯(lián)免疫ELISA檢測、生化測試、液相氣相檢測、Icp-MS測試、載體構(gòu)建、RACE、全基因合成、線粒體測序、熒光定量PCR、基因克隆、定點突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)等。極威生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本，以市場需求為導(dǎo)向，以為客戶創(chuàng)造價值為己任的精神，致力于發(fā)展中國的科研事業(yè)。
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